Plasmide CRISPR d'Activation (h) TBX18: sc-401564-ACT

TBX18 code un facteur de transcription de la famille T-box qui dirige la mise en place des patrons embryonnaires et l’organogenèse en régulant la spécification des lignages et les programmes de différenciation mésenchymateuse. Au cours du développement humain, TBX18 est fortement associé à la morphogenèse urogénitale et musculosquelettique et contribue à la formation du système de conduction cardiaque via le contrôle transcriptionnel de réseaux de gènes du développement. Son activité s’entrecroise avec des processus de signalisation qui façonnent les frontières tissulaires et les décisions de destin cellulaire, notamment des voies influencées par les signaux WNT, BMP et FGF. Une expression ou une fonction dérégulée de TBX18 a été associée à des anomalies congénitales du développement, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les circuits transcriptionnels à l’origine du développement des organes et de phénotypes liés aux maladies.

TBX18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TBX18 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TBX18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TBX18 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TBX18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TBX18. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TBX18 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TBX18 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TBX18 dans les cellules tumorales présentant une expression de TBX18 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.