TANC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406741

Übersicht

TANC1 codiert TANC, ein multidomäniges Scaffold-Protein, das an exzitatorischen Synapsen angereichert ist und dort die Organisation der postsynaptischen Dichte sowie den Aufbau von Signalkomplexen unterstützt. Über seine Interaktionen mit synaptischen Rezeptoren und Regulatoren des Zytoskeletts trägt TANC zur Morphogenese dendritischer Spines, zur synaptischen Stabilität und zum aktivitätsabhängigen Umbau bei. Diese Funktionen verorten TANC1 in Signalwegen der neuronalen Entwicklung und synaptischen Plastizität, die die Schaltkreisbildung und homöostatische Signalübertragung beeinflussen. Eine veränderte Regulation synaptischer Gerüstproteine und Konnektivität wird mit Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neuropsychiatrischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, wodurch TANC1 ein hilfreicher Genort ist, um Genotyp-Phänotyp-Zusammenhänge in neuronalen Modellen zu untersuchen.

Das TANC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TANC1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TANC1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TANC1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TANC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TANC1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TANC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TANC1-Exone abzielen, die für die TANC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TANC1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TANC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TANC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TANC1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TANC HDR-Plasmid (h) und TANC HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TANC1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TANC1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.