T1-cadherin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401986-ACT

CDH9 codifica a T1-caderina, uma molécula de adesão célula–célula dependente de cálcio da superfamília das caderinas, que contribui para a padronização dos tecidos e para a manutenção das junções intercelulares. Por meio de ligação homofílica e de sua conexão com a organização do citoesqueleto, o CDH9 influencia programas de polaridade celular, migração e crescimento de neuritos, que se cruzam com a sinalização do desenvolvimento e com o controle do crescimento mediado por contato. Perfis alterados de expressão de caderinas podem deslocar o equilíbrio entre adesão e motilidade e remodelar ambientes locais de sinalização, tornando o CDH9 um nó útil para estudar mecanismos subjacentes à invasão celular, diferenciação e formação de redes. Na biologia humana, o CDH9 desregulado tem sido investigado em contextos em que a adesão e a conectividade estão comprometidas, incluindo processos do neurodesenvolvimento e associados ao câncer.

T1-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

T1-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de T1-cadherin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de T1-cadherin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via T1-cadherin em células tumorais com expressão de CDH9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.