Tβ-10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407294

Panoramica

TMSB10 codifica la timosina beta-10 (Tβ-10), una piccola proteina che sequestra l’actina e regola la disponibilità di G-actina, influenzando così la dinamica dei filamenti di actina, la forma cellulare e la motilità. Modulando il rimodellamento del citoscheletro, Tβ-10 incide su processi quali la progressione del ciclo cellulare, l’adesione e le risposte allo stress, con effetti a valle su reti di segnalazione legate alla migrazione e alla sopravvivenza. Un’alterata espressione di TMSB10 è stata riportata in diversi contesti patologici, inclusi la biologia dei tumori e gli stati infiammatori, in cui cambiamenti nell’organizzazione dell’actina possono contribuire all’invasione, a fenotipi associati all’angiogenesi e al rimodellamento tissutale. Di conseguenza, TMSB10 è spesso studiato in vie che collegano la regolazione del citoscheletro a programmi trascrizionali e a transizioni dello stato cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMSB10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMSB10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMSB10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Tβ-10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMSB10 per lo studio della segnalazione di Tβ-10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMSB10 critici per la funzione di Tβ-10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMSB10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Tβ-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Tβ-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMSB10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Tβ-10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Tβ-10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMSB10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMSB10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.