Synaptoporin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-428189

Übersicht

Synpr kodiert Synaptoporin, ein Membranprotein synaptischer Vesikel, das in präsynaptischen Endigungen von Mausneuronen angereichert ist und zur Synaptophysin-Familie gehört. Synaptoporin trägt zur Biogenese und zum Recycling synaptischer Vesikel bei und beeinflusst die Neurotransmitterfreisetzung sowie die kurzzeitige synaptische Plastizität über aktivitätsabhängiges Trafficking und die Kopplung von Endozytose und Exozytose. Es wird häufig im Kontext hippocampaler und glutamaterger Schaltkreise untersucht, in denen die Vesikeldynamik die Erregbarkeit von Netzwerken mitprägt. Eine veränderte Zusammensetzung präsynaptischer Vesikelproteine, einschließlich synaptoporinassoziierter Signalwege, ist für Untersuchungen zu Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neurodegenerativer Erkrankungen relevant, ohne dass damit klinische Aussagen verbunden sind.

Das Synaptoporin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Synpr-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Synpr-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Synpr nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Synaptoporin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Synpr-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Synaptoporin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Synpr-Exone abzielen, die für die Synaptoporin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Synpr-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Synaptoporin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Synaptoporin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Synpr-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Synaptoporin HDR-Plasmid (m) und Synaptoporin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Synpr-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Synpr-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.