Plasmide CRISPR/Cas9 KO SVCT2 (h): sc-401350

Présentation

SLC23A2 code le transporteur de vitamine C dépendant du sodium SVCT2, un transporteur membranaire à haute affinité qui assure l’entrée cellulaire de l’ascorbate afin de maintenir l’équilibre rédox intracellulaire. En soutenant les dioxygénases dépendantes de l’ascorbate, SVCT2 influence la maturation du collagène, la régulation épigénétique via les enzymes TET/JmjC et la signalisation de l’hypoxie par l’intermédiaire des prolyl-hydroxylases, avec un impact sur l’homéostasie de la matrice extracellulaire et les programmes transcriptionnels. L’activité de SVCT2 est également liée à la fonction mitochondriale et aux réponses au stress oxydant dans les tissus à forte activité métabolique. Des altérations de l’expression de SLC23A2 ou de la gestion de l’ascorbate ont été associées à une susceptibilité accrue aux lésions oxydatives et à des phénotypes pertinents pour la neurobiologie, la biologie cardiovasculaire et le métabolisme des cellules cancéreuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SVCT2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC23A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC23A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC23A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SVCT2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC23A2 pour l'étude de la signalisation de SVCT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC23A2 essentiels à la fonction de SVCT2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC23A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SVCT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SVCT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC23A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SVCT2 plasmide HDR (h) et le SVCT2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC23A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC23A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.