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SUMF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-406543 | 20 µg | $397.00 |
SUMF1 codifica l’enzima generatore di formilglicina (FGE), un’ossidasi luminale del reticolo endoplasmatico necessaria per l’attivazione post-traduzionale di tutte le sulfatasi tramite la conversione di una cisteina conservata in Cα-formilglicina. Questa modifica è essenziale per l’idrolisi degli esteri solfati lisosomiali ed extracellulari, collegando SUMF1 al turnover dei glicosaminoglicani, al metabolismo degli sfingolipidi e, più in generale, alle vie cataboliche dipendenti dal lisosoma. L’alterazione di SUMF1 riduce l’attività globale delle sulfatasi e può portare a fenotipi di accumulo lisosomiale caratterizzati da una compromessa eliminazione dei substrati e da un’omeostasi cellulare alterata. SUMF1 è quindi ampiamente studiato nel contesto della biologia delle sulfatasi, della funzione lisosomiale e dei meccanismi alla base della patogenesi associata alla deficienza multipla di sulfatasi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SUMF1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SUMF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SUMF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SUMF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SUMF1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SUMF1 per lo studio della segnalazione di SUMF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
CRISPR +/- HDR
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.