Plasmide CRISPR/Cas9 KO SULT1C4 (h): sc-417528

Présentation

SULT1C4 code une sulfotransférase cytosolique qui catalyse le transfert d’un groupement sulfate du 3′-phosphoadénosine-5′-phosphosulfate (PAPS) vers des substrats contenant des fonctions hydroxyle ou amine, générant des métabolites sulfatés dont la solubilité et la bioactivité sont modifiées. Cette réaction de conjugaison de phase II contribue à la détoxification des xénobiotiques et à la modulation de molécules endogènes de signalisation, en s’intégrant à des réseaux cellulaires plus larges qui contrôlent l’équilibre rédox, la réactivité hormonale et l’élimination des métabolites. Les variations de l’activité des sulfotransférases peuvent influencer le devenir métabolique des substances chimiques environnementales et des médicaments, ce qui rend SULT1C4 pertinent pour l’étude des différences interindividuelles de sensibilité chimique et du métabolisme spécifique aux tissus. Une capacité de sulfation dérégulée a également été associée dans la littérature à des modifications de la biologie de l’exposition et à des phénotypes métaboliques liés aux maladies, ce qui étaye l’utilisation de SULT1C4 comme nœud fonctionnel dans la recherche centrée sur le métabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SULT1C4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SULT1C4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SULT1C4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SULT1C4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SULT1C4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SULT1C4 pour l'étude de la signalisation de SULT1C4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SULT1C4 essentiels à la fonction de SULT1C4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SULT1C4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SULT1C4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SULT1C4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SULT1C4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SULT1C4 plasmide HDR (h) et le SULT1C4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SULT1C4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SULT1C4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.