Plásmido CRISPR de Activación (m) STC1: sc-423182-ACT

La estaniocalcina 1 (STC1), codificada por el gen murino *Stc1*, es una hormona glucoproteica secretada implicada en la homeostasis del calcio y del fosfato y, de forma más amplia, en la señalización adaptativa al estrés. STC1 está regulada por programas asociados a la hipoxia y la inflamación, y se ha relacionado con la modulación de la función mitocondrial, las respuestas al estrés oxidativo y las vías de supervivencia celular. En diversos tejidos, STC1 influye en procesos angiogénicos, metabólicos e inmunitarios, lo que la hace relevante para estudios de lesión isquémica, fibrosis y remodelación del microambiente asociado a tumores. Se han observado alteraciones en la expresión de STC1 en múltiples contextos de enfermedad, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para diseccionar el “crosstalk” entre la señalización de estrés y la homeostasis tisular.

STC1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Stc1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

STC1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Stc1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Stc1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de STC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Stc1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de STC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía STC1 en células tumorales con expresión de Stc1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.