Plasmide CRISPR/Cas9 KO STAMBP (h): sc-404726

Présentation

STAMBP code une enzyme de déubiquitination de la famille JAMM (AMSH) qui se lie à des composants d’ESCRT-0 tels que STAM et HGS afin de remodeler les chaînes d’ubiquitine portées par les cargos endocytés. En régulant le tri dépendant de l’ubiquitine, STAMBP contribue au contrôle de la downrégulation des récepteurs, du trafic endosomal et de la dégradation lysosomale, modulant ainsi les sorties de signalisation de voies telles qu’EGFR et d’autres récepteurs de facteurs de croissance. L’activité de STAMBP participe à la protéostasie et aux réponses au stress cellulaire en modulant la topologie des chaînes d’ubiquitine et les décisions de destin des cargos au niveau des endosomes précoces. Des altérations de STAMBP ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une dysrégulation immunitaire, ce qui en fait une cible utile pour étudier les défauts de la voie endosome–lysosome et la signalisation par l’ubiquitine dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO STAMBP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène STAMBP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du STAMBP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert STAMBP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine STAMBP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en STAMBP pour l'étude de la signalisation de STAMBP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de STAMBP essentiels à la fonction de STAMBP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de STAMBP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le STAMBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le STAMBP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus STAMBP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le STAMBP plasmide HDR (h) et le STAMBP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie STAMBP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles STAMBP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.