Plasmide CRISPR/Cas9 KO SR-2A (h): sc-401532

Présentation

HTR2A code le récepteur humain 2A de la 5‑hydroxytryptamine (SR‑2A), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à Gq/11 pour stimuler la signalisation de la phospholipase C, le renouvellement des inositol phosphates, la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire et l’activation de la protéine kinase C. SR‑2A module l’excitabilité neuronale et la plasticité synaptique et s’intègre à des réseaux plus larges de neurotransmetteurs via des interactions croisées avec MAPK/ERK et des voies apparentées de seconds messagers. Les variations d’expression et de signalisation de HTR2A sont fréquemment étudiées dans le contexte de phénotypes neuropsychiatriques, notamment des altérations du tonus sérotoninergique et du fonctionnement des circuits corticaux médié par les récepteurs. En tant que récepteur membranaire aux dynamiques régulatrices complexes, SR‑2A constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer une signalisation spécifique de voie et les mécanismes de désensibilisation/internalisation du récepteur dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SR-2A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HTR2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HTR2A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HTR2A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SR-2A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HTR2A pour l'étude de la signalisation de SR-2A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HTR2A essentiels à la fonction de SR-2A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HTR2A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SR-2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SR-2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HTR2A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SR-2A plasmide HDR (h) et le SR-2A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HTR2A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HTR2A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.