SPRED2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404738

Übersicht

SPRED2 (sprouty related EVH1 domain containing 2) kodiert ein zytosolisches Adapterprotein, das die Signalübertragung von Rezeptortyrosinkinasen negativ reguliert, indem es die Ras–Raf–MEK–ERK/MAPK-Kaskade hemmt. Durch Interaktionen mit Komponenten wie Raf und Neurofibromin trägt SPRED2 dazu bei, wachstumsfaktorgetriebene Proliferation, Differenzierung und inflammatorische Signalgebung zu begrenzen und so die homöostatische Kontrolle zellulärer Antworten zu unterstützen. Veränderte SPRED2-Expression oder -Funktion wurde mit einer dysregulierten MAPK-Aktivität in der Krebsbiologie sowie mit Immun- und Entzündungsprozessen in Verbindung gebracht, einschließlich Konstellationen mit aberranter Zytokin- und Chemokin-Signalgebung. Als „Bremse“ des Signalwegs wird SPRED2 häufig hinsichtlich seiner Rolle bei der Feinabstimmung von Signalstärke und -dauer downstream von RTKs und anderen upstream liegenden Inputs untersucht, die auf ERK konvergieren.

Das SPRED2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SPRED2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SPRED2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SPRED2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SPRED2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SPRED2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SPRED2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SPRED2-Exone abzielen, die für die SPRED2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SPRED2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SPRED2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SPRED2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SPRED2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SPRED2 HDR-Plasmid (h) und SPRED2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SPRED2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SPRED2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.