Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
SPRED2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404738
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SPRED2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SPRED2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SPRED2 Antibody (6G8): sc-517018
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SPRED2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-404738 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SPRED2 (sprouty related EVH1 domain containing 2) codifica una proteina adattatrice citosolica che regola negativamente la segnalazione delle tirosin-chinasi recettoriali inibendo la cascata Ras–Raf–MEK–ERK/MAPK. Attraverso interazioni con componenti quali Raf e neurofibromina, SPRED2 contribuisce a limitare la proliferazione, la differenziazione e la segnalazione infiammatoria guidate dai fattori di crescita, favorendo il controllo omeostatico delle risposte cellulari. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SPRED2 sono state associate a un’attività MAPK disregolata nella biologia del cancro e a processi immunitari e infiammatori, inclusi contesti che coinvolgono una segnalazione aberrante di citochine e chemochine. In quanto “freno” della via, SPRED2 è spesso studiata per il suo ruolo nel modulare ampiezza e durata della segnalazione a valle delle RTK e di altri input a monte che convergono su ERK.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPRED2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPRED2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPRED2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPRED2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPRED2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPRED2 per lo studio della segnalazione di SPRED2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SPRED2 critici per la funzione di SPRED2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPRED2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SPRED2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPRED2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPRED2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SPRED2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPRED2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPRED2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPRED2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.