spectrin α II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400910-ACT

SPTAN1 codifica a espectrina humana α II, um componente central do esqueleto de membrana espectrina–actina que sustenta a integridade da membrana plasmática e organiza a arquitetura do citoesqueleto cortical. A espectrina α II forma heterotetrâmeros com β-espectrinas para atuar como arcabouço de canais iônicos e complexos de sinalização, contribuindo para processos como adesão celular, mecanotransdução e manutenção da polaridade celular. Por meio de suas funções estruturais e de adaptação, SPTAN1 influencia vias dependentes do citoesqueleto, incluindo tráfego de membranas, estabilidade de junções e migração celular. A desregulação das redes de espectrina tem sido associada a alterações na homeostase neuronal e epitelial e é relevante para estudos de distúrbios do citoesqueleto e de perturbações de sinalização ligadas a fenótipos de doença.

spectrin α II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SPTAN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

spectrin α II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SPTAN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SPTAN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de spectrin α II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SPTAN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de spectrin α II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via spectrin α II em células tumorais com expressão de SPTAN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.