Sp4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402568-ACT

O SP4 humano codifica o fator de transcrição Sp4, um membro da família Sp/KLF que se liga a elementos promotores ricos em GC para regular programas de expressão gênica que controlam a diferenciação neuronal, a plasticidade sináptica e a transcrição dependente de atividade. O Sp4 contribui para processos de controle da cromatina e da transcrição que moldam trajetórias do neurodesenvolvimento e a excitabilidade neuronal, conectando-o a vias que regulam a maturação de axônios e dendritos e a formação de circuitos. Alterações na expressão ou na função de SP4/Sp4 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, reforçando sua relevância para o estudo da desregulação de redes transcricionais no sistema nervoso. Em modelos celulares, a modulação de SP4 pode ser usada para investigar genes-alvo a jusante e circuitos de regulação gênica que influenciam estados neuronais e gliais.

Sp4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sp4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sp4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sp4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sp4 em células tumorais com expressão de SP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.