Sox10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400129-ACT

O SOX10 humano codifica o fator de transcrição Sox10, uma proteína de ligação ao DNA do tipo high-mobility group (HMG) essencial para a especificação da crista neural e o comprometimento de linhagem, particularmente em programas gliais e melanocíticos. O Sox10 coordena redes transcricionais que controlam a diferenciação, a migração e a sobrevivência, integrando-se a vias do desenvolvimento e à remodelação da cromatina para regular a expressão de genes-alvo no sistema nervoso periférico. Alterações na atividade de SOX10 estão associadas a neurocristopatias que afetam o desenvolvimento da glia entérica e periférica e a uma biologia de melanócitos desregulada, tornando-o um nó valioso para estudar decisões de destino celular e circuitos de regulação gênica. Na pesquisa biomédica, SOX10 é frequentemente usado para investigar o controle transcricional da mielinização, da pigmentação e da plasticidade de células derivadas da crista neural.

Sox10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOX10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOX10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOX10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOX10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox10 em células tumorais com expressão de SOX10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.