SNRK CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407320-ACT

Die sukrosenicht-fermentierende verwandte Kinase (SNRK) ist eine Serin/Threonin-Kinase aus der Familie der AMPK-verwandten Kinasen, die den zellulären Energiestatus mit metabolischen und stressadaptiven Programmen verknüpft. SNRK wurde mit der Regulation der mitochondrialen Funktion, des Lipid- und Glukosestoffwechsels sowie der inflammatorischen Signalübertragung in Verbindung gebracht; beschrieben sind zudem Funktionen in der Endothel- und Herzbiologie sowie in der Homöostase des Fettgewebes. Über eine phosphorylierungsabhängige Kontrolle nachgeschalteter Effektoren greift SNRK in Signalwege ein, die Nährstoffsensorik, Antworten auf oxidativen Stress und zelluläres Remodeling steuern. Eine veränderte SNRK-Aktivität oder -Expression wurde mit kardiometabolischen Phänotypen und entzündungsassoziierten Krankheitsmechanismen assoziiert, was SNRK zu einem nützlichen Ziel macht, um energieregulierte Signalnetzwerke in menschlichen Zellen zu untersuchen.

SNRK Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNRK-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SNRK Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNRK-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNRK-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SNRK-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNRK-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SNRK-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SNRK-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNRK-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.