Plásmido CRISPR de Activación (h) SMC4: sc-405067-ACT

SMC4 codifica una ATPasa central de mantenimiento estructural de los cromosomas que, junto con SMC2, forma el andamiaje catalítico de los complejos condensina necesarios para la condensación cromosómica mitótica, la resolución de las cromátidas hermanas y la segregación cromosómica fiel. Mediante la extrusión de bucles de ADN dependiente de ATP y la organización de la cromatina de orden superior, SMC4 contribuye a la dinámica de la cromatina asociada a la replicación, a la coordinación de la respuesta al daño en el ADN y al mantenimiento de la estabilidad del genoma. La expresión o función desregulada de SMC4 se ha asociado con inestabilidad cromosómica y fenotipos de proliferación aberrante observados en múltiples contextos tumorales, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la aneuploidía y el control de los puntos de control del ciclo celular. Además, la arquitectura de la cromatina dependiente de SMC4 influye en programas transcripcionales vinculados a la mitosis y a las respuestas al estrés, proporcionando un puente mecanístico entre la estructura cromosómica y la regulación génica.

SMC4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SMC4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SMC4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SMC4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SMC4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SMC4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SMC4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SMC4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SMC4 en células tumorales con expresión de SMC4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.