SIRT3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400675-NIC

SIRT3は、ミトコンドリアに局在するNAD⁺依存性脱アセチル化酵素をコードしており、タンパク質のアセチル化状態を調節することで、酸化代謝、レドックス恒常性、ならびにミトコンドリアの品質管理を統合的に制御します。TCA回路、脂肪酸β酸化、抗酸化防御に関わる標的を脱アセチル化することで、SIRT3はATP産生、活性酸素種（ROS）の処理、ストレス適応経路に影響を及ぼします。SIRT3活性は、AMPKやPGC-1αに関連した代謝リモデリングや、マイトファジーに関与する過程など、栄養感知およびミトコンドリア恒常性維持のプログラムとも交差します。SIRT3依存的な脱アセチル化の破綻は、代謝疾患、神経変性、心血管系ストレス応答、がんに伴う代謝リプログラミングで観察されるミトコンドリア機能変化と関連づけられており、疾患生物学における広範な重要性を裏づけています。

SIRT3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SIRT3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SIRT3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SIRT3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SIRT3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。