SIK2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-406982-LAC

SIK2 (salt-induzierbare Kinase 2) ist eine Serin/Threonin-Kinase aus der Familie der AMPK-verwandten Kinasen, die metabolische und Stress-Signale integriert, um transkriptionelle und zytoskelettale Programme zu koordinieren. Sie moduliert die CREB/CRTC-Signalübertragung durch eine phosphorylierungsabhängige Kontrolle der CRTC-Koaktivatoren und verknüpft damit die cAMP-Signalgebung mit der Genexpression in Prozessen wie dem Glukose- und Lipidstoffwechsel, der Adipozytenfunktion und der Zellzyklusprogression. SIK2 wurde außerdem mit der Regulation des Zentrosoms und der Kontrolle der Mitose in Verbindung gebracht und koppelt so Kinase-Signalwege an Proliferation und zelluläre Fitness. Eine fehlregulierte SIK2-Aktivität und -Expression wurde mit veränderter metabolischer Homöostase und tumorassoziierten Signalzuständen assoziiert, was SIK2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung kinasegetriebener Regulation in humanen Zellmodellen macht.

SIK2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SIK2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SIK2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SIK2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SIK2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SIK2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.