SerpinB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402083-ACT

SERPINB1 codifica o inibidor intracelular de proteases serínicas SerpinB1, uma serpina do clado B que restringe proteases derivadas de neutrófilos, como a elastase, a catepsina G e a proteinase 3, para limitar lesões proteolíticas durante a inflamação. Ao modular a atividade dessas proteases, a SerpinB1 influencia a sobrevivência de leucócitos, as respostas antimicrobianas e programas de remodelação tecidual que se cruzam com a sinalização da imunidade inata e com vias de estresse inflamatório. A desregulação da expressão ou da atividade de SERPINB1 tem sido associada a alterações na homeostase inflamatória e a danos mediados por proteases em condições que afetam tecidos mucosos e pulmonares, bem como em contextos mais amplos de doenças imunomediadas. Essas características tornam o SERPINB1 um alvo útil para estudar o equilíbrio protease–antiprotease, a biologia de neutrófilos e a remodelação associada à inflamação.

SerpinB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SERPINB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SerpinB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SERPINB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SERPINB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SerpinB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SERPINB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SerpinB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SerpinB1 em células tumorais com expressão de SERPINB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.