Septin 4 Plasmide Double Nickase (m): sc-422333-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Septin 4 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Septin 4 Double Nickase Plasmid (m) e il Septin 4 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sept4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Septin 4 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422333-NIC | 20 µg | $410.00 |
Sept4 codifica la septina 4, una proteina citoscheletrica scaffold legante il GTP che si assembla in filamenti e anelli di septine etero-oligomerici per organizzare i domini di membrana e le interfacce tra actina e microtubuli. Nelle cellule di topo, SEPT4 contribuisce alla citocinesi, alla polarità cellulare, al traffico vescicolare e alla compartimentalizzazione a livello del midbody e di altre barriere di diffusione, coordinando processi come l’abscissione e il rimodellamento corticale. L’architettura dipendente dalle septine influenza le vie di segnalazione e di risposta allo stress regolando la localizzazione spaziale dei complessi proteici e la dinamica delle membrane. Un’organizzazione delle septine alterata è stata associata, in modelli sperimentali, a difetti nella divisione cellulare, nell’omeostasi neuronale e sinaptica e a una suscettibilità modificata a fenotipi degenerativi e proliferativi.
Septin 4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sept4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sept4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sept4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sept4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.