SENP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402148-ACT

Humanes SENP2 kodiert eine SUMO-spezifische Protease, die die SUMOylierung rückgängig macht, indem sie SUMO-Vorläufer prozessiert und SUMO von Substratproteinen abspaltet. Dadurch werden Proteinstabilität, Lokalisation und Aktivität fein abgestimmt. Durch die dynamische Kontrolle SUMO-abhängiger Signalwege beeinflusst SENP2 die Transkriptionsregulation, DNA-Schadensantworten, die Zellzyklusprogression und stressadaptive Signalwege, einschließlich des Crosstalks mit der ubiquitinvermittelten Proteostase. Eine veränderte SUMO-Homöostase und eine dysregulierte SENP2-Aktivität wurden mit Veränderungen in entzündlicher Signalgebung, Genomstabilität und onkogenen Programmen in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für Studien zur Krebsbiologie und verwandten zellulären Phänotypen unterstreicht. SENP2 wird zudem als Knotenpunkt genutzt, um den Fluss im SUMO-Signalweg und die substratspezifische Regulation in unterschiedlichen humanen Zellmodellen zu untersuchen.

SENP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SENP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SENP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SENP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SENP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SENP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SENP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SENP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SENP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SENP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.