SEMA6D Double Nickase Plasmid (m): sc-431980-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SEMA6D Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SEMA6D Double-Nickase-Plasmid (m) und SEMA6D Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sema6d abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SEMA6D: sc-393258
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SEMA6D Double Nickase Plasmid (m) | sc-431980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SEMA6D Double Nickase Plasmid (m2) | sc-431980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sema6d kodiert das Maus-Semaphorin SEMA6D, ein transmembranöses Leitsignal, das über Plexin-Rezeptoren signalisiert und kontaktabhängige Zell-Zell-Kommunikation reguliert. SEMA6D moduliert die Umgestaltung des Zytoskeletts, gerichtete Migration und Axon-Leitfindung und verknüpft damit die Semaphorin–Plexin-Signalgebung mit der Aktivität von Rho-Familien-GTPasen und der nachgeschalteten Aktindynamik. Neben der neuronalen Musterbildung trägt SEMA6D zur Gewebemorphogenese sowie zu vaskulären und immunbezogenen Prozessen bei, in denen Leitbahnen die Positionierung von Zellen steuern. Fehlregulierte Semaphorin-Signalgebung, einschließlich veränderter Sema6d-Expression, wird genutzt, um Mechanismen aberranter Innervation, der Wanderung entzündlicher Zellen und des Umbaus des Mikromilieus in krankheitsrelevanten Modellen zu untersuchen.
SEMA6D Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sema6d-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sema6d abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sema6d-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sema6d-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.