SEMA6A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422887

概要

Sema6a は、膜貫通型のガイダンス因子 SEMA6A をコードする遺伝子であり、神経回路の形成において、成長円錐の挙動、軸索の経路選択、神経細胞の移動を調節することで回路組み立てを形作るクラス6セマフォリンです。SEMA6A はプレキシン受容体との相互作用および下流の Rho ファミリー GTPase シグナル伝達を介して、発生過程における細胞骨格動態、細胞接着、接触依存的反発を制御します。マウスモデルでは Sema6a 機能の変化が、視床皮質および皮質脊髄路の連結異常や、より広範な神経発達表現型と関連づけられており、神経配線異常症の基盤機構に対する関連性を示唆しています。SEMA6A 依存的シグナルは、セマフォリン経路が細胞運動性や組織パターニングを調節する文脈においても研究されています。

SEMA6A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSema6a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sema6a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sema6aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SEMA6Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SEMA6Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sema6a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SEMA6Aの機能に不可欠なSema6aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sema6aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SEMA6A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSEMA6A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sema6a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SEMA6A HDRプラスミド（m）および SEMA6A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSema6aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSema6a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。