Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA5A (m): sc-422885

Présentation

Sema5a code l’indice de guidage transmembranaire SEMA5A, un membre de la famille des sémaphorines qui régule l’orientation des axones, la migration neuronale et la formation des synapses via une signalisation médiée par des récepteurs remodelant le cytosquelette. Au-delà de ses rôles dans le système nerveux, SEMA5A contribue à des programmes d’adhérence et de motilité cellulaires dans de nombreux tissus, en interaction avec des voies qui façonnent le mouvement directionnel et l’organisation des tissus. Une expression ou une signalisation altérée de SEMA5A a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et a été étudiée dans des contextes impliquant une connectivité aberrante et des microenvironnements inflammatoires. Dans des modèles murins, la perturbation de Sema5a est utilisée pour disséquer les mécanismes d’assemblage des circuits et pour relier la signalisation de guidage à des changements d’état cellulaire au cours du développement et de processus pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA5A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sema5a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sema5a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sema5a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA5A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sema5a pour l'étude de la signalisation de SEMA5A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sema5a essentiels à la fonction de SEMA5A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sema5a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA5A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEMA5A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sema5a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA5A plasmide HDR (m) et le SEMA5A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sema5a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sema5a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.