Plasmide CRISPR d'Activation (h) SASH1: sc-403567-ACT

SASH1 (SAM and SH3 domain containing 1) code une protéine d’échafaudage/adaptatrice cytoplasmique impliquée dans l’organisation de complexes de transduction du signal en aval des récepteurs et en réponse à des signaux de stress. Dans les cellules humaines, SASH1 a été associé à la régulation de la dynamique du cytosquelette, de l’adhérence cellulaire, de la migration et de processus liés à la barrière endothéliale, ce qui est cohérent avec des rôles dans le contrôle de la prolifération et de l’architecture tissulaire. Une expression altérée de SASH1 ainsi que des variations génétiques ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, notamment en biologie tumorale et dans des phénotypes vasculaires ou pigmentaires, ce qui en fait un nœud utile pour étudier des sorties de signalisation dépendantes du contexte. Ces fonctions positionnent SASH1 comme une cible de recherche pour disséquer les voies qui couplent la signalisation extracellulaire à des programmes transcriptionnels et à la motilité cellulaire.

SASH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SASH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SASH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SASH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SASH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SASH1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SASH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SASH1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SASH1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SASH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.