Particules Lentivirales d'Activation (h) S-100A16: sc-406149-LAC

S100A16 code pour S-100A16, une petite protéine de liaison au calcium de type EF-hand appartenant à la famille S100, qui contribue à la signalisation dépendante du Ca2+ et à la modulation des interactions protéine–protéine. S-100A16 a été associée à la régulation de la différenciation cellulaire, de la dynamique du cytosquelette et des processus associés aux membranes, et elle est souvent étudiée dans le contexte des réponses au stress et du remodelage métabolique. Des profils d’expression modifiés de S100A16 ont été rapportés dans de nombreux types de tumeurs ainsi que dans des contextes cardiométaboliques et inflammatoires, ce qui étaye son utilisation comme marqueur et comme nœud fonctionnel au sein de voies pertinentes pour les maladies. En tant que protéine de type capteur de calcium, S-100A16 peut influencer indirectement les programmes transcriptionnels via des réseaux de signalisation qui couplent les flux de calcium à des changements d’état cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales S-100A16 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de S100A16 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales S-100A16 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription S100A16, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de S-100A16. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif S100A16 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.