S-100 β chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422787

Visão geral

S100b codifica a cadeia β da S-100, uma proteína EF-hand ligante de Ca2+ enriquecida em astrócitos e outras populações gliais, que atua como modulador de sinalização intracelular e fator parácrino extracelular. Por meio de interações dependentes de cálcio com alvos do citoesqueleto e enzimáticos, a S-100 β influencia a extensão de neuritos, a progressão do ciclo celular e respostas ao estresse, podendo acionar sinalização mediada por receptores, como vias associadas ao RAGE que convergem para programas de MAPK e NF-κB. No sistema nervoso central, S100b é amplamente usada como marcador glial e está relacionada à neuroinflamação, à regulação da barreira hematoencefálica e a respostas ao estresse oxidativo ou metabólico. Alterações na expressão de S100b foram relatadas em diversos modelos de doenças neurológicas e neurodegenerativas e em paradigmas de lesão, sustentando sua utilidade para dissecar a comunicação glia–neurônio e redes de sinalização inflamatória.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO S-100 β chain (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene S100b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do S100b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do S100b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína S-100 β chain.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de S100b para a investigação da sinalização de S-100 β chain, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) S100b críticos para a função S-100 β chain
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos S100b para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo S-100 β chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo S-100 β chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus S100b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo S-100 β chain Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR S-100 β chain (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia S100b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo S100b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.