S-100 β chain Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400707

Panoramica

S100B codifica la catena beta S-100, una proteina legante il calcio della famiglia S100 che modula la segnalazione intracellulare del Ca2+ e le risposte extracellulari mediate da recettori in modo dipendente dal contesto cellulare. Partecipa alla regolazione della dinamica del citoscheletro, della progressione del ciclo cellulare, delle risposte allo stress ossidativo e della segnalazione infiammatoria, incluse interazioni che influenzano processi legati a MAPK/ERK e NF-κB. La S-100β è ampiamente studiata nella biologia degli astrociti e nella neuroinfiammazione, e un’espressione alterata è stata associata a lesioni neurologiche e condizioni neurodegenerative, nonché alla segnalazione del microambiente tumorale in alcuni tumori. Queste funzioni rendono S100B un nodo utile per analizzare gli stati di attivazione gliale, la segnalazione da stress e le vie di comunicazione cellula–cellula.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO S-100 β chain (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene S100B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del S100B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto S100B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina S-100 β chain.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di S100B per lo studio della segnalazione di S-100 β chain, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni S100B critici per la funzione di S-100 β chain
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di S100B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal S-100 β chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal S-100 β chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus S100B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal S-100 β chain Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR S-100 β chain (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia S100B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio S100B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.