ROM-K Double Nickase Plasmid (h): sc-404241-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ROM-K Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ROM-K Double-Nickase-Plasmid (h) und ROM-K Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCNJ1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ROM-K: sc-393189
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ROM-K Double Nickase Plasmid (h) | sc-404241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ROM-K Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNJ1 kodiert ROM-K (Kir1.1), einen inward-rectifier-Kaliumkanal, der das K⁺-Recycling über die apikale Membran renaler Tubulusepithelien vermittelt und damit die Natriumrückresorption sowie die Kaliumhomöostase unterstützt. Die ROM-K-Aktivität ist mit transepithelialen Ionentransportprozessen im dicken aufsteigenden Ast der Henle-Schleife und im Sammelrohr gekoppelt, beeinflusst das Membranpotenzial und treibt elektrogene Transportvorgänge an. Der Kanal ist an renalen Elektrolyt-Handling-Pathways beteiligt, die sich mit aldosteronregulierten Transportprogrammen sowie zellulären Volumen-/osmotischen Antworten überschneiden. Eine Fehlregulation oder ein Funktionsverlust von KCNJ1 ist mit erblichen salzverlierenden Tubulopathien assoziiert, die durch eine beeinträchtigte renale K⁺-Konservierung und einen veränderten Säure-Basen-Haushalt gekennzeichnet sind, wodurch KCNJ1 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu Ionentransportstörungen darstellt.
ROM-K Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNJ1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNJ1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNJ1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNJ1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.