RNF149 더블 틈내기효소 플라스미드 (m): sc-426694-NIC
- Target species: mouse
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- RNF149 Double Nickase Plasmid (m) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- RNF149 더블 니케이스 플라스미드 (m) 및 RNF149 더블 니케이스 플라스미드 (m2)는 Rnf149을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
RNF149 더블 틈내기효소 플라스미드 (m) | sc-426694-NIC | 20 µg | $410.00 |
마우스 Rnf149는 유비퀴틴 의존적 단백질 분해와 세포 단백질 항상성(proteostasis) 조절에 기여하는 RING 핑거 E3 유비퀴틴 리가아제인 RNF149를 암호화한다. 유비퀴틴–프로테아좀 시스템 조절의 일부로서 RNF149는 단백질 품질 관리, 신호 강도 조절, 그리고 세포 생존과 항상성을 형성하는 스트레스 적응 반응을 관장하는 경로들과 관련이 있다. 유비퀴틴화 프로그램의 변화는 성장 조절 이상 및 신경퇴행과 연관된 단백질 독성 스트레스 등 질환 관련 표현형에 광범위하게 관여하는 것으로 알려져 있어, RNF149는 기전 연구에 유용한 핵심 노드가 된다. RNF149의 기능을 분석하는 연구는 포유류 세포에서 E3 리가아제가 기질 안정성과 그에 따른 하위 경로 출력 값을 어떻게 조율하는지 이해하는 데 도움을 준다.
RNF149 더블 니카제 플라스미드(m)는 mouse 세포주 내 Rnf149 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 Rnf149 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 Rnf149의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, Rnf149 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.