RIP Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-422681-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RIPO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase RIP (m) e o Plasmídeo Double Nickase RIP (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Ripk1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:RIP Anticorpo (C-12): sc-133102
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
RIP Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-422681-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RIP Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-422681-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene Ripk1 de camundongo codifica a quinase 1 de serina/treonina que interage com receptores (RIPK1), um regulador central da sinalização do receptor de TNF e de receptores de reconhecimento de padrões, que coordena a expressão de genes inflamatórios e decisões sobre o destino celular. As atividades de arcabouço (scaffolding) e quinase de RIPK1 ajustam o equilíbrio entre programas de sobrevivência dirigidos por NF-κB/MAPK e vias de morte celular regulada, incluindo apoptose e necroptose por meio da sinalização RIPK3–MLKL. Por meio desses pontos de controle, RIPK1 contribui para a homeostase da imunidade inata, respostas a citocinas e sinalização ao estresse em diversos tipos celulares. A desregulação da sinalização de RIPK1 tem sido implicada em patologias inflamatórias e em mecanismos associados à neurodegeneração, tornando Ripk1 um locus frequentemente investigado em estudos de sinalização relevantes para doenças.
RIP O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Ripk1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Ripk1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Ripk1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Ripk1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.