RIN3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432255

概要

Rin3は、受容体型チロシンキナーゼ（RTK）シグナル伝達をエンドサイトーシス輸送につなぐ、RasおよびRabの相互作用因子であるRIN3をコードしています。RIN3はRab5ファミリーGTPアーゼに対するグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）として機能します。マウス細胞では、RIN3はクラスリン介在性エンドサイトーシス、初期エンドソームの成熟、ならびに受容体の取り込み（内在化）とリサイクリングの調節に関与し、これらの過程が下流シグナルの強度と持続時間を規定します。これらの役割を通じて、Rin3は細胞活性化状態における小胞動態、膜ターンオーバー、細胞骨格の協調制御に影響を与えます。RIN3活性の変化は、エンドソーム輸送や受容体シグナル伝達の破綻を伴う疾患関連メカニズムと結び付けられており、炎症性および神経変性の表現型に寄与する経路における研究対象として支持されています。

RIN3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRin3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rin3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rin3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RIN3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RIN3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rin3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RIN3の機能に不可欠なRin3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rin3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RIN3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRIN3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rin3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RIN3 HDRプラスミド（m）および RIN3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRin3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRin3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。