RIN3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432255

Übersicht

Rin3 kodiert RIN3, einen Ras- und Rab-Interaktor, der als Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor für GTPasen der Rab5-Familie fungiert und die Signalübertragung von Rezeptor-Tyrosinkinasen mit dem endozytotischen Transport verknüpft. In Mauszellen ist RIN3 an der clathrinvermittelten Endozytose, der Reifung früher Endosomen sowie der Regulation von Rezeptor-Internalisierung und -Recycling beteiligt – Prozesse, die die Stärke und Dauer nachgeschalteter Signale prägen. Über diese Funktionen beeinflusst Rin3 die Vesikeldynamik, den Membranumsatz und die Koordination des Zytoskeletts während zellulärer Aktivierungszustände. Eine veränderte RIN3-Aktivität wurde mit krankheitsrelevanten Mechanismen in Verbindung gebracht, die eine fehlregulierte endosomale Trafficking-Dynamik und Rezeptorsignalisierung einschließen, was seine Untersuchung in Signalwegen unterstützt, die zu entzündlichen und neurodegenerativen Phänotypen beitragen.

Das RIN3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rin3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rin3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rin3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RIN3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rin3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RIN3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rin3-Exone abzielen, die für die RIN3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rin3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RIN3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RIN3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rin3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RIN3 HDR-Plasmid (m) und RIN3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rin3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rin3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.