RBM15 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-417289-NIC

RBM15(RNA 결합 모티프 단백질 15)는 핵 내 RNA 결합 인자로, 대체 스플라이싱, RNA 안정성, mRNA 수출을 조절함으로써 전사 후 유전자 발현을 조절한다. RBM15는 리보핵단백질 복합체에서 기능하며, 핵심 writer 구성요소와의 상호작용을 통해 m6A 의존적 RNA 대사를 조절하는 등, 후성유전 및 RNA 수식과 연관된 과정들과도 연결되어 있다. 또한 RBM15는 계통(lineage) 결정과 조혈 프로그램에 기여하며, RBM15 관련 RNA 처리 과정의 이상 조절은 종양성 전사 네트워크와 연관되어 있는 것으로 보고되었다. 여기에는 급성 백혈병에서 RBM15가 관여하는 염색체 재배열도 포함된다. 이러한 역할로 인해 RBM15는 인간 모델 시스템에서 RNA 처리와 세포 상태 전이 간의 결합(coupling)을 규명하는 데 유용한 표적이 된다.

RBM15 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 RBM15 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 RBM15 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 RBM15의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, RBM15 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

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