RBFOX3/NeuN Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402976-ACT

RBFOX3, também conhecido como NeuN, codifica uma proteína de ligação a RNA enriquecida em neurônios que reconhece motivos UGCAUG para regular programas de splicing alternativo essenciais para a diferenciação neuronal, a maturação sináptica e a manutenção da identidade neuronal. Por meio do controle da inclusão de éxons e do equilíbrio entre isoformas de mRNA, o RBFOX3 integra-se a redes pós-transcricionais que moldam a dinâmica do citoesqueleto, o crescimento de neuritos e a expressão gênica dependente de atividade. O splicing direcionado pela família RBFOX está ligado a vias que governam o equilíbrio excitatório/inibitório e a conectividade neuronal, tornando o RBFOX3 um marcador e regulador amplamente utilizado em estudos de desenvolvimento e função neural. Programas de splicing neuronal desregulados envolvendo fatores RBFOX têm sido associados a mecanismos de doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas, o que reforça sua relevância para modelar defeitos de processamento de RNA em sistemas humanos.

RBFOX3/NeuN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RBFOX3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RBFOX3/NeuN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RBFOX3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RBFOX3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RBFOX3/NeuN. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RBFOX3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RBFOX3/NeuN no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RBFOX3/NeuN em células tumorais com expressão de RBFOX3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.