Radixin Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422634-ACT

Il gene murino Rdx codifica la radixin, una proteina di impalcatura della famiglia ERM (ezrin–radixin–moesin) che collega l’F-actina corticale alle proteine transmembrana per organizzare l’architettura della membrana. La radixin sostiene la formazione dei microvilli, la polarità cellulare e la stabilità delle giunzioni aderenti, e aiuta a coordinare hub di segnalazione che influenzano la dinamica delle GTPasi Rho e il rimodellamento del citoscheletro. Attraverso queste funzioni, la radixin contribuisce alla migrazione cellulare regolata e alle proprietà di barriera dell’epitelio, processi comunemente studiati nella biologia dello sviluppo e nelle ricerche sull’omeostasi tissutale. Alterazioni dell’accoppiamento membrana–citoscheletro dipendente dalle ERM e della regolazione delle giunzioni vengono spesso esaminate in modelli di invasione, infiammazione e progressione metastatica, rendendo Rdx un nodo rilevante per la ricerca meccanicistica.

Radixin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Rdx senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Radixin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Rdx nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Rdx, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Radixin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Rdx nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Radixin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Radixin nelle cellule tumorali con espressione di Rdx silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.