Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 2A: sc-403154-ACT

El gen humano **RAB2A** codifica la pequeña GTPasa **Rab 2A**, un regulador central del tráfico vesicular del retículo endoplásmico al aparato de Golgi y dentro del propio Golgi, que coordina la clasificación de la carga, el anclaje de vesículas y los eventos de fusión mediante el ciclo entre estados unidos a GDP y a GTP. Rab 2A sostiene la homeostasis de la vía secretora y contribuye a la organización de los orgánulos, incluida la integridad del Golgi y la dinámica de membranas que influyen en el procesamiento y la entrega de proteínas. A través de su papel en el tráfico de membranas, RAB2A se cruza con vías que controlan la proteostasis, el recambio de receptores y las respuestas al estrés vinculadas al crecimiento y la supervivencia celulares. La señalización de las GTPasas Rab y los programas de tráfico desregulados, incluidas las redes asociadas a RAB2A, se estudian con frecuencia en el contexto de la señalización oncogénica, la neurobiología y las interacciones patógeno–huésped, donde la capacidad de transporte vesicular puede moldear fenotipos relevantes para la enfermedad.

Rab 2A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB2A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 2A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB2A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 2A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB2A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 2A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 2A en células tumorales con expresión de RAB2A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.