Rab 27b Double Nickase Plasmid (h): sc-403498-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rab 27b Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rab 27b Double-Nickase-Plasmid (h) und Rab 27b Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RAB27B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rab 27b: sc-517602
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rab 27b Double Nickase Plasmid (h) | sc-403498-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab 27b Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403498-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB27B kodiert die kleine GTPase Rab27b, einen zentralen Regulator des Vesikeltransports, der das Andocken und die Fusion sekretorischer Granula und Exosomen an der Plasmamembran koordiniert. Rab27b wirkt über den zyklischen Wechsel zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen und interagiert mit Effektor-Netzwerken, die an der Umgestaltung des Zytoskeletts, der Membrandynamik und der regulierten Exozytose beteiligt sind. In menschlichen Zellen beeinflusst der RAB27B-abhängige Transport Sekretionsprogramme, die für Immun- und Entzündungssignale, die Freisetzung von Thrombozyten- und Neutrophilgranula sowie die Tumor–Stroma-Kommunikation über extrazelluläre Vesikel relevant sind. Eine dysregulierte RAB27B-Expression oder -Aktivität wurde mit veränderten Vesikelsekretions-Phänotypen in Verbindung gebracht, wie sie bei Krebsprogression und metastatischem Verhalten beobachtet werden, was RAB27B als mechanistischen Knotenpunkt in der Membrantransportforschung stützt.
Rab 27b Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RAB27B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RAB27B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RAB27B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RAB27B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.