Plásmido CRISPR de Activación (h) R-Spondin2: sc-402648-ACT

RSPO2 codifica R-Spondin2, un agonista secretado de la señalización canónica Wnt/β-catenina que amplifica la actividad de los receptores Wnt mediante interacciones con LGR4/5/6 y la modulación del recambio de receptores mediado por RNF43/ZNRF3. Al potenciar los programas transcripcionales impulsados por Wnt, R-Spondin2 influye en el patrón embrionario, la diferenciación epitelial y mesenquimal y la homeostasis tisular, con gran relevancia para procesos como la morfogénesis, el mantenimiento de células madre/progenitoras y la renovación de barreras. La desregulación de la señalización de RSPO2 se ha asociado con una activación anómala de la vía en defectos del desarrollo y en contextos oncogénicos, lo que lo convierte en un nodo útil para diseccionar redes de regulación génica dependientes de Wnt. Su modo de acción extracelular también vincula a RSPO2 con estudios de señalización paracrina en modelos de organoides, cocultivo y modelos centrados en el microambiente.

R-Spondin2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RSPO2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

R-Spondin2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RSPO2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RSPO2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de R-Spondin2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RSPO2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de R-Spondin2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía R-Spondin2 en células tumorales con expresión de RSPO2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.