PRODH2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-405889-KO-2

Panoramica

PRODH2 codifica un’ossidoreduttasi mitocondriale flavino-dipendente che partecipa al catabolismo di prolina e idrossiprolina, collegando il turnover degli amminoacidi all’equilibrio redox cellulare e al metabolismo energetico. Accoppiando le reazioni di trasferimento di elettroni alla catena respiratoria, l’attività di PRODH2 può influenzare l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno e l’adattamento metabolico in condizioni di stress. La disregolazione del metabolismo della prolina è stata associata ad alterazioni della funzione mitocondriale e della segnalazione redox osservate in una serie di fenotipi neuroevolutivi e metabolici. Di conseguenza, PRODH2 è oggetto di studio in vie che collegano il metabolismo mitocondriale, l’utilizzo degli amminoacidi e le risposte allo stress ossidativo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRODH2 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRODH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRODH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRODH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRODH2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRODH2 per lo studio della segnalazione di PRODH2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRODH2 critici per la funzione di PRODH2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRODH2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRODH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PRODH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRODH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRODH2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PRODH2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRODH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRODH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.