PRK2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407649-ACT

PKN2 codifica a proteína quinase N2 (PRK2), uma quinase de serina/treonina da família AGC que atua como efetora da sinalização mediada por GTPases da família Rho, coordenando a dinâmica do citoesqueleto, a renovação de adesões focais e a motilidade celular. A atividade de PRK2 integra sinais de vias acopladas a GPCR e a fatores de crescimento para influenciar a remodelação de actina, a formação de fibras de estresse e o tráfego vesicular, com efeitos downstream sobre programas de proliferação e sobrevivência. Por meio dessas funções, PRK2 tem sido implicada em processos relevantes para a invasão de células tumorais e o comportamento metastático, bem como em uma desregulação mais ampla da migração e da sinalização dependente de adesão observada em diversos contextos de doença. Portanto, modular a expressão endógena de PKN2 é útil para dissecar a conectividade entre a sinalização associada a Rho/ROCK, a organização do citoesqueleto e os desfechos transcricionais.

PRK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PKN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PKN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PKN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRK2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PKN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRK2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRK2 em células tumorais com expressão de PKN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.