Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO prefoldin 3 (m): sc-423658
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- prefoldin 3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique prefoldin 3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: prefoldin 3 Antibody (D-5): sc-390524
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO prefoldin 3 (m) | sc-423658 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Vbp1 code la préfodine 3, une co-chaperonne faisant partie de la machinerie de type préfodine, qui contribue à l’homéostasie des protéines cytosoliques en aidant au repliement et à la stabilisation de certaines protéines clientes. La préfodine 3 participe à des réseaux de protéostase liés à l’organisation du cytosquelette, à l’assemblage de complexes macromoléculaires et à la coordination avec des voies de chaperonnes qui limitent le mauvais repliement des protéines en situation de stress cellulaire. Par ces mécanismes, l’activité de Vbp1 peut influencer la progression du cycle cellulaire, l’adaptation au stress et l’équilibre entre repliement et dégradation des protéines. La dérégulation des voies associées aux chaperonnes est pertinente dans des modèles de stress protéotoxique et de neurodégénérescence, où une capacité de repliement et un contrôle qualité altérés peuvent moduler des phénotypes liés à la maladie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO prefoldin 3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vbp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vbp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vbp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine prefoldin 3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vbp1 pour l'étude de la signalisation de prefoldin 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Vbp1 essentiels à la fonction de prefoldin 3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vbp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le prefoldin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le prefoldin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vbp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le prefoldin 3 plasmide HDR (m) et le prefoldin 3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vbp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vbp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.