Plasmide Double Nickase (h) POGK: sc-412865-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) POGK correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide POGK Double Nickase (h) et le plasmide POGK Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant POGK. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: POGK Antibody (F-1): sc-515752
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) POGK | sc-412865-NIC | 20 µg | $410.00 |
POGK (élément transposable pogo dérivé, doté d’un domaine KRAB) code une protéine nucléaire issue d’une transposase de type pogo et serait impliqué dans la régulation de l’état de la chromatine et de la transcription via une activité de liaison à l’ADN. La présence d’un domaine KRAB suggère un recrutement potentiel de complexes corépresseurs associés à KAP1/TRIM28, reliant ainsi POGK à la formation d’hétérochromatine et au contrôle épigénétique de l’expression génique. Une régulation altérée des facteurs contenant un domaine KRAB est largement pertinente pour la stabilité du génome, les programmes de développement et les transitions d’état cellulaire, ce qui fait de POGK une cible utile pour des études mécanistiques de la répression transcriptionnelle et de l’organisation de la chromatine. L’étude de perturbations de POGK peut aider à préciser comment des protéines dérivées de transposases sont réaffectées au sein des réseaux régulateurs humains et comment ces mécanismes se recoupent avec des dérégulations transcriptionnelles associées aux maladies.
POGK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus POGK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de POGK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de POGK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de POGK.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.