Plasmide CRISPR/Cas9 KO plexin-B2 (m): sc-431226

Présentation

Plxnb2 code la plexine‑B2, un récepteur transmembranaire des sémaphorines de classe 4 qui intègre des signaux de guidage à la réorganisation du cytosquelette et à la motilité cellulaire. La signalisation de la plexine‑B2 module l’activité des GTPases de la famille Rho et s’articule avec des voies de récepteurs tyrosine kinases afin de coordonner l’adhésion, la migration et la morphogenèse au cours du développement neural et de l’organisation tissulaire. Dans les systèmes murins, la fonction de Plxnb2 est fréquemment étudiée dans le guidage axonal, le branchement épithélial et la régulation des interactions cellule‑cellule au sein des tissus en développement et adultes. Une signalisation sémaphorine–plexine dérégulée a été associée à des phénotypes anormaux de migration et d’invasion dans des contextes pertinents pour la maladie, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud mécanistique au sein des voies contrôlant l’architecture tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO plexin-B2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Plxnb2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Plxnb2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Plxnb2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine plexin-B2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Plxnb2 pour l'étude de la signalisation de plexin-B2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Plxnb2 essentiels à la fonction de plexin-B2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Plxnb2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le plexin-B2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le plexin-B2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Plxnb2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le plexin-B2 plasmide HDR (m) et le plexin-B2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Plxnb2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Plxnb2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.