PLAA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422286

Panoramica

Plaa codifica la proteina attivatrice della fosfolipasi A2 (PLAA), un fattore citosolico conservato implicato nella segnalazione dei fosfolipidi e nella dinamica delle membrane attraverso la regolazione dell’attività della fosfolipasi A2 e della produzione di mediatori lipidici derivati dall’acido arachidonico. PLAA contiene domini di legame all’ubiquitina ed è stata associata a processi di controllo qualità delle proteine, inclusi il traffico e il turnover, dipendenti dall’ubiquitina, di proteine associate alla membrana. Attraverso queste funzioni, PLAA può influenzare cascate di segnalazione infiammatoria, l’organizzazione endolisosomiale e vie sensibili allo stress che intersecano l’immunità innata e l’omeostasi cellulare. La disregolazione della segnalazione lipidica e della proteostasi mediata dall’ubiquitina è ampiamente rilevante per la neuroinfiammazione, i fenotipi metabolici e i processi degenerativi, rendendo Plaa un nodo utile per studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PLAA (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Plaa in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Plaa insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Plaa a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PLAA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Plaa per lo studio della segnalazione di PLAA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Plaa critici per la funzione di PLAA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Plaa per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PLAA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PLAA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Plaa. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PLAA Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PLAA (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Plaa per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Plaa definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.