Plásmido CRISPR de Activación (h) PITSLRE A: sc-402476-ACT

CDK11B codifica la quinasa de serina/treonina humana PITSLRE A, un miembro de la familia CDC2L implicado en la señalización ligada al ciclo celular y el control de la transcripción. PITSLRE A se ha relacionado con procesos asociados a la ARN polimerasa II, el empalme (splicing) de ARN y el procesamiento de ARNm, así como con la coordinación de la proliferación y las respuestas al estrés mediante redes de proteínas dependientes de la fosforilación. Como parte de estos circuitos reguladores, la expresión o actividad alteradas de CDK11B se estudian en contextos de crecimiento celular desregulado, mantenimiento del genoma y vías relacionadas con la apoptosis, que con frecuencia se ven perturbadas en la biología de las enfermedades. Por ello, CDK11B es una diana útil para analizar el control de programas de expresión génica y transiciones de estado celular impulsados por quinasas en sistemas modelo humanos.

PITSLRE A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDK11B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PITSLRE A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDK11B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDK11B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PITSLRE A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDK11B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PITSLRE A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PITSLRE A en células tumorales con expresión de CDK11B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.