Particules Lentivirales d'Activation (h2) Pim-1: sc-400376-LAC-2

Le gène humain PIM1 code Pim-1, une kinase sérine/thréonine constitutivement active qui intègre les signaux des cytokines et des facteurs de croissance afin de réguler la survie cellulaire, la progression du cycle cellulaire et les réponses transcriptionnelles. Pim-1 agit en aval de voies telles que JAK/STAT et coopère avec les signalisations PI3K–AKT et NF-κB, en modulant notamment la phosphorylation de substrats impliqués dans le contrôle de l’apoptose (p. ex. BAD) et dans les programmes de prolifération. Une expression ou une activité dérégulée de PIM1 a été associée à une croissance anormale des cellules hématopoïétiques et lymphoïdes, et est fréquemment étudiée dans le cadre des réseaux de signalisation oncogéniques et des mécanismes de résistance aux traitements. L’édition du gène PIM1 facilite les études mécanistiques de la signalisation pilotée par les kinases, la cartographie des voies par phosphoprotéomique et les criblages de génomique fonctionnelle en biologie du cancer et dans des modèles d’immunologie.

Les particules d'activation lentivirales Pim-1 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PIM1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Pim-1 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PIM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Pim-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PIM1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.