PI 3-kinase p85β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401991

Visão geral

PIK3R2 codifica a subunidade regulatória p85β da fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K) de classe IA, que estabiliza e modula as subunidades catalíticas p110 e conecta tirosina-quinases de receptores ativados e proteínas adaptadoras à sinalização de PI3K. Por meio do controle da produção de PIP3, a PI3-quinase p85β governa o eixo AKT–mTOR e vias relacionadas que regulam o crescimento celular, o metabolismo, a sobrevivência e a dinâmica do citoesqueleto. A desregulação do controle da via PI3K está amplamente implicada na sinalização oncogênica, nas respostas à insulina/IGF e na função de células imunes. Como a p85β influencia tanto a atividade basal quanto a dependente de estímulo da PI3K, ela é frequentemente estudada em contextos de retroalimentação de sinalização, crosstalk entre vias e reorganização de redes.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p85β (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PIK3R2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PIK3R2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PIK3R2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PI 3-kinase p85β.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PIK3R2 para a investigação da sinalização de PI 3-kinase p85β, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PIK3R2 críticos para a função PI 3-kinase p85β
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PIK3R2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PI 3-kinase p85β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PI 3-kinase p85β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PIK3R2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PI 3-kinase p85β Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PI 3-kinase p85β (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PIK3R2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PIK3R2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.