PGAM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404283

概要

ホスホグリセリン酸ムターゼ1（PGAM1）は細胞質に局在する解糖系酵素で、3-ホスホグリセリン酸と2-ホスホグリセリン酸の相互変換を触媒し、解糖系フラックスおよび下流の生合成中間体のバランスを調節します。中央炭素代謝における重要な分岐点に位置することで、PGAM1はATP産生を支えるとともに、ヌクレオチドやアミノ酸合成に関連する同化経路の前駆体を供給します。PGAM1活性の変化は代謝リプログラミングや増殖性表現型と関連づけられており、腫瘍代謝や細胞増殖制御の研究において重要です。PGAM1はまた、解糖系、レドックス恒常性、ストレス適応シグナル伝達のつながりを検討するための結節点としても用いられます。

PGAM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPGAM1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PGAM1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PGAM1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PGAM1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PGAM1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PGAM1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PGAM1の機能に不可欠なPGAM1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PGAM1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PGAM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPGAM1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PGAM1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PGAM1 HDRプラスミド（h）および PGAM1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPGAM1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPGAM1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。