Plasmide CRISPR/Cas9 KO PFK-1 (h): sc-401023

Présentation

PFKM code l’isoforme musculaire de la phosphofructokinase‑1 (PFK‑1), une enzyme limitante de la glycolyse qui catalyse la conversion, dépendante de l’ATP, du fructose‑6‑phosphate en fructose‑1,6‑bisphosphate. En tant que point de contrôle majeur du flux glycolytique, la PFK‑1 intègre une régulation allostérique par l’état énergétique cellulaire et divers métabolites afin de coordonner l’utilisation du glucose avec la demande en ATP. L’activité de PFKM influence le métabolisme central du carbone, la production de lactate et des voies biosynthétiques en aval associées à des programmes de prolifération et d’adaptation au stress. La perturbation génétique de PFKM est liée à la glycogénose de type VII (maladie de Tarui) et sert à étudier comment une glycolyse altérée contribue aux dysfonctionnements métaboliques et à des phénotypes cellulaires pertinents pour la biologie neuromusculaire et hématologique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PFK-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PFKM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PFKM, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PFKM à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PFK-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PFKM pour l'étude de la signalisation de PFK-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PFKM essentiels à la fonction de PFK-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PFKM pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PFK-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PFK-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PFKM. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PFK-1 plasmide HDR (h) et le PFK-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PFKM pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PFKM définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.