PFK-1 CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-401023

개요

PFKM은 해당과정의 속도 제한 효소인 포스포프룩토키나아제-1(Phosphofructokinase-1, PFK-1)의 근육 아이소폼을 암호화하며, ATP 의존적으로 과당-6-인산(fructose-6-phosphate)을 과당-1,6-이인산(fructose-1,6-bisphosphate)으로 전환하는 반응을 촉매합니다. 해당과정 플럭스 조절의 핵심 지점으로서 PFK-1은 세포의 에너지 상태와 대사체에 의한 알로스테릭 조절을 통합해, 포도당 이용을 ATP 수요와 조율합니다. PFKM 활성은 중심 탄소 대사, 젖산 생성, 그리고 증식 및 스트레스 적응 프로그램과 연결된 하위 생합성 경로에 영향을 미칩니다. PFKM의 유전적 기능 장애는 글리코겐 저장병 VII형(타루이병, Tarui disease)과 연관되며, 변화된 해당과정이 대사 기능 이상과 신경근 및 혈액학적 생물학과 관련된 세포 표현형에 어떻게 기여하는지 탐구하는 데 활용됩니다.

PFK-1 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 PFKM 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 PFKM 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 PFKM의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 PFK-1 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 PFK-1 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 PFKM 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• PFK-1 기능에 중요한 PFKM 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 PFKM 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• PFK-1 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 PFK-1 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 PFKM 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  PFK-1 HDR 플라스미드 (h) 및 PFK-1 HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 PFKM 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 PFKM 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.